胰島素的配置方法:
胰島素需要用鹽酸來稀釋配。 PH值2.0
胰島素干粉:
1)取0.1mL的濃鹽酸 加入12mL的純水中,所得到溶液的pH≈1
2)取pH≈1的稀鹽酸1-2mL 溶解100mg的牛胰島素,一般情況下2-3分鐘胰島素能溶解(期間使用移液器輕輕吹打能加速溶解過程。)
3)溶解好后向溶液中加入純水使溶液的體積為10mL(此時溶液pH≈2)。溶液經(jīng)過0.22μm的濾膜過濾, 溶液濃度為10mg/mL。按每管1mL分裝到因子管中,-20℃避光保存。
胰島素高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法相比有哪些優(yōu)點?
高效液相色譜法(HPLC)是20世紀(jì)60年代末至70年代初迅速發(fā)展起來的分離分析技術(shù),它是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上,引入氣相色譜的理論,在技術(shù)上采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測器,實現(xiàn)了分析速度快、分離效率高和操作自動化,這種柱色譜技術(shù)被稱做高效液相色譜法。
高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法比較具有如下優(yōu)點。
(1)在分析速度上,高效液相色譜比經(jīng)典的液相色譜要快數(shù)百倍。這是因為經(jīng)典液相色譜是在常壓下靠重力加料,洗脫速度很慢,通常分離一個組分需要幾小時,甚至幾天,而高效液相色譜采用高壓泵輸液,流動相流速較高,個別可高達(dá)100mL/min以上,分析時間大大縮短。
(2)在分離效率上,高效液相色譜法比經(jīng)典液相色譜法要高得多。經(jīng)典液相色譜法,通常采用粒度較粗(100um)的固定相做填料,柱效率較低,而高效液相色譜法采用均勻的微顆粒(3~50um)做固定相,理論塔板數(shù)*高可達(dá)10萬/m。
(3)在樣品檢測上,高效液相色譜儀使用了新型的檢測器,檢測靈敏度大大提高,自動化程度也日趨完備。另外,經(jīng)典的液相色譜柱一般只用一次。用后,其中的固定相即棄去,既費人力,又費物力,而高效液相色譜則使用密閉的、胰島素可重復(fù)使用的色譜柱,進(jìn)樣采用注射器和進(jìn)樣閥,準(zhǔn)確而快速,操作方便,因此高效液相色譜對照品無論是在定性還是定量方面,都比經(jīng)典的液相色譜有較高的準(zhǔn)確性和精密度。
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